甘油激酶/9030-66-4

中文:甘油激酶
英文:GK
CAS:9030-66-4
分子式:C3H8O3
纯度:≥90%
货期:24h
货号:HH1205-01
规格:5ku
中文同义词:甘油激酶; 甘油激酶GK;
英文同义词:GK; GLK; HK4; HHF3;
技术指标

外观:白色或淡黄色无定型冻干粉末蛋白纯度:≥90%; 比活性:≥15 U/mg 酶粉; 过氧化氢酶:≤0.001%; 尿酸酶:≤0.01%; 己糖激酶:≤0.01%; ATP 酶:≤0.005%

酶学性质

来源:微生物; 分类:EC 2.7.1.30; 分子量:55 kDa(SDS-PAGE); 等电点:5.0; Km值:4.4×10-5 M(Glycerol), 3.7×10-5

M(ATP); 抑制剂:Ag+,Hg2+; 最适:pH 7.5



酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟消耗1μmol甘油所需的酶量。

试剂准备

试剂I:0.3 M 甘油(称取0.552 g 甘油用纯水定容到20 mL)。

试剂II:纯水配制1 kU/mL POD。

试剂III:50 mM TOOS(1.477 g TOOS 溶于 100 mL UP水)。

试剂IV:50 mM 4-AA(1.016 g 4-AA溶于 100 mL UP 水)。

试剂V:20 U/mL甘油-3-磷酸氧化酶。

试剂VI:200 mM HEPES,含 20 mM MgCl2 和 40 mM ATP(0.953 g HEPES,0.076 gMgCl2,0.44 g ATP,用10 mL 水溶解,用 NaOH 调节 pH 至 7.9,定容到 20 mL)。

按如下配制反应混合物:

试剂VI:10 mL; 试剂I: 1.67 mL; 试剂II: 400μL; 试剂III: 3 mL; 试剂IV: 3 mL; 试剂V: 40 mL; 双蒸水定容至 100 mL

酶稀释液:20 mM, pH 7.5 磷酸钾缓冲液。样品:用酶稀释液将酶稀释至 0.2-0.4 U/mL。

操作步骤

1. 在 1 mL 比色皿中加入 1.0 mL 反应混合物。

2. 37℃温浴2 min。

3. 加入0.02 mL待测样品,混匀。

4. 用分光光度计在555 nm测定样品1 min内的吸光度变化 ΔAs。

*用 酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度 ΔAb。ΔA=ΔAs-ΔAb